Funkcjonalna ekspresja zmutowanego nabłonka pseudohypoaldosteronizmu typu I na kanale Na + pozbawionym regionu tworzącego pory jego podjednostka ad 5

Niska przewodność Li + potwierdziła względną utratę selektywności dla Li + w porównaniu z Na + obserwowaną w makroskopowych eksperymentach prądowych. Jak opisali inni (17), Po był bardzo zmienny i nie zaobserwowano widocznych różnic. Odpowiedzieliśmy na pytanie o liczbę kanałów na powierzchni komórki za pomocą testu wiązania, opisanego poprzednio (12). Oocyty wstrzyknięto. FLAG. FLAG,. L535stop. FLAG. FLAG lub. FLAG. FLAG. Testy wiązania z jodowanymi przeciwciałami anty-FLAG wykonywano codziennie przez 4 dni. Liczba zmutowanych kanałów wykrytych na powierzchni komórki wzrastała dopiero 4 dni po wstrzyknięciu (Figura 3a). W tym dniu osiągnęli bardzo znaczący poziom wiązania w stosunku do wstrzykiwanych oocytów. Liczba wykrytych kanałów na powierzchni komórki była równoległa do pojawienia się prądu kanału Na + (Figura 3b), prowadząc do stałego stosunku wiązania / prądu (Figura 3c). Wskazuje to, że liczba zmutowanych kanałów na powierzchni komórki zmniejszała się równolegle ze zmniejszeniem INa +. Można to również zilustrować, wykreślając powiązanie z INa + (rysunek 3d). Pomiędzy liczbą kanałów na powierzchni komórki istniała liniowa zależność (opisana jako wiązanie na oocyt) i makroskopowego wrażliwości na amiloryd Na + dla kanałów zmutowanych i typu dzikiego, ale nachylenia linii regresji nie były znacząco różne. Te wyniki wskazują, że zaobserwowany. L535stop. redukcja prądu wynika głównie z proporcjonalnego zmniejszenia liczby kanałów na powierzchni komórki. Rysunek 3 (a) Ilościowe określenie liczby cząsteczek kanałowych obecnych na powierzchni komórki. Znakowane epitopem podjednostki. FLAG i. FLAG rENaC zostały połączone z. typu dzikiego (wypełnione słupki),. L535stop (otwarte słupki) lub wody (szare słupki) w oocytach Xenopus. Wartości są średnie. SEM z 2 różnych eksperymentów z 12 oocytami na eksperyment i na stan. Wyznaczono wartości P niesparowanego testu ucznia. (b) Próby Na + dla całych komórek, wrażliwe na amiloryd. prądy kanału są niewykrywalne. (c) Stosunek związanego IgG anty-FLAG (wiązanie; a) do całkowitego prądu komórkowego Na + (b) dla . i zmutowany. L535stop. kanały. ND, nie określono. (d) Reprezentacja wartości wiązania wykreślonych przeciwko INa +. Nachylenie krzywych regresji liniowej nie jest statystycznie różne (y = 59x, r2 = 0,44 dla kanałów [otwarte kwadraty i linia przerywana], a y = 48x, r2 = 0,54 dla zmutowanego kanału. L535stop [wypełnione diamenty i linia ciągła] Zmniejszona liczba kanałów na powierzchni komórki wynika z retencji białek kanałowych w przedziałach wewnątrzkomórkowych Aby zaobserwować subkomórkową dystrybucję kanałów typu dzikiego i zmutowanych, wykorzystaliśmy immunofluorescencję do wykrywania lokalizacji epitopów. znakowane podjednostki w kriosekcjach oocytów, które zostały wstrzyknięte albo z wodą, FLAGFAGAG, A55stopFAGAGFAGAG, alboFAGAGFAGAG. Oocyty z iniekcją FLAGF FLAG wykazywały jasny sygnał immunofluorescencyjny na obwodzie oocyt i słabsze zabarwienie w przedziale wewnątrzkomórkowym (ryc. 4b) Wyższe powiększenie i kosztowanie cytoszkieletu aktynowego, który jest bardzo bogaty w mikrokosmki na powierzchni komórki, potwierdziło, że immunofluorescencja na obrzeżach oocyt oznacza reprezentowane przez FLAG podjednostki ENaC obecne na powierzchni komórki (Figura 4, f oraz j). Oocyty eksprymujące L535stop . FLAGPFAG wykazywały jedynie słaby sygnał w błonie komórkowej, ale wewnątrzkomórkowe barwienie było wyraźnie zwiększone, co wskazuje na retencję kanałów w przedkomórkowym przedziale (Figura 4, c, g, i k). . L535stop . FLAG. FLAG był, jak. FLAG. FLAG, przeważnie znajdowany na roślinnym biegunie oocytu (Figura 4, b i c), co sugeruje, że przemyt. L535stop. FLAG. FLAG na powierzchnię komórki, chociaż. mniej wydajny, przestrzega tych samych zasad, co w przypadku FLAG. W oocytach eksprymujących FLAGFAGAG (Figura 4, d, h i 1), nie obserwowano barwienia błony komórkowej związanego z ENa 4 dni po wstrzyknięciu; Oznaczone FLAG podjednostki ENaC znaleziono wyłącznie w przedziałach wewnątrzkomórkowych. W oocytach z iniekcją wody (ryc. 4, a, e i i) nie zaobserwowano sygnału immunofluorescencyjnego dla ENaC. Krążek cytotoksyczny aktyny był barwiony tak, jak w innych grupach oocytów. Figura 4Immunofluorescencja oocytów, do których wstrzyknięto FLAGFAGAG (b, f i j), L535stop . FLAGFAGAG (c, g, i k), FLAGFAGAG (d, h i 1), lub woda (a, e i i). Wykrywanie podjednostek ENaC znakowanych FLAG mAb anty-FLAG (ayh) i cytoszkieletu aktyny mikrokosmków ze związaną z rodaminą fallalliną (Ia). (a. d) powiększenia małej mocy; pasek skali w d: 100 .m. (e. l) Powiększenia dużych mocy; pasek skali w l: 20 m. Oprócz powolnego pojawiania się i / lub szybszego odzyskiwania zmutowanego kanału na powierzchni komórki, zmniejszona liczba kanałów może być spowodowana wczesną degradacją kompleksu kanałów (krótszy okres półtrwania), nieprawidłowym montażem 3 podjednostek, mgła lub kombinacja którejkolwiek z tych możliwości. Wierne tłumaczenie protei
[przypisy: śmieszne znaczenie imion męskich, na wspólnej piosenka końcowa, pod mocnym aniołem cda ]
[patrz też: skyrim spolszczenie, anno 1404 spolszczenie, odzież i opakowania sprawdzian ]