Funkcjonalna ekspresja zmutowanego nabłonka pseudohypoaldosteronizmu typu I na kanale Na + pozbawionym regionu tworzącego pory jego podjednostka czesc 4

Mutanty ENaC mają taki sam wzór ekspresji w czasie. Nie wykryto żadnej znaczącej różnicy. Każdy punkt reprezentuje średnią. SEM makroskopowych prądów Na + kanału uzyskanych z 15. 26 oocytów (4 różne partie). Aby ocenić domniemaną różnicę w ekspresji tego mutanta, powiązaną in vivo między ludźmi i myszami, badaliśmy mutację ludzkiego mutanta R508. Kiedy są wspólnie z człowiekiem. i . ENaC,. R508stop doprowadził do podobnej wrażliwości na amiloryd obecnej jako mutant szczura. L535stop. (Figura 2c). Oba mutanty miały ten sam przebieg w czasie, z opóźnionym szczytem aktywności w porównaniu z kanałami typu dzikiego. Człowiek prądy były znacznie mniejsze niż. R508stop. prądy, ale znacznie wyższe niż oocyty z iniekcją wody, w dniu 3 po iniekcji (dane nie pokazane). Różnice we właściwościach prądu makroskopowego między kanałami ludzkimi i szczurzymi. Ponieważ druga domena transbłonowa tworzy pory kanału i bierze udział w filtrze selektywności i wrażliwości na amiloryd (8), scharakteryzowaliśmy prądy makroskopowe wynikające z rzutowania ludzkiego r508stopu i szczurzenia. L535stop z ich odpowiednimi. i . podjednostki. Wykazali subtelne różnice (Tabela 1). Ludzki. R508stop. kanały miały podobną wrażliwość na amiloryd (amiloryd Ki = 0,16. 0,04. M) i selektywność jonową, określane jako stosunek prądu wrażliwego na amiloryd A Li + / Na + lub Na + / K + (ILi + / INa + = 1,4. 0,1; INa + / IK +> 50), jak ludzkie kanały typu dzikiego. Natomiast szczur. L535stop. kanały miały niższą wrażliwość na amiloryd niż kanały typu dzikiego (amiloryd Ki = 5,97. 0,38. M, P <0,001) i utraconą selektywność Li + / Na + (ILi + / INa + = 1,0. 0,1, P <0,001). Ale zachowały selektywność dla Na + w stosunku do K + (INa + / IK +> 50). Prądy z oocytów, którym wstrzyknięto szczur. ENaC wykazywał cechy zbliżone do właściwości szczura. L535stop .. Wrażliwość na amiloryd była jednak nieco wyższa (amiloryd Ki = 2,38. 0,72. M, P <0,001) w porównaniu ze zmutowanym. L535stop .. Selektywność dla Na + w stosunku do K + była statystycznie różna od typu dzikiego, ale pozostała wysoka (INa + / IK + = 21; P <0,001). Niestety, nie byliśmy w stanie przeprowadzić podobnych badań na ludziach. kanały, ponieważ prądy były zbyt niskie. Tabela Charakterystyka mikroskopowa prądu szczurzego i ludzkiego ENaC wyrażona w oocytach Xenopus Jak podano wcześniej (15), szczury. i kanały mają różne charakterystyki makroskopowe (tabela 1):. kanały przypominają kanały typu dzikiego, podczas gdy kanały wykazują oporność na amiloryd i utratę selektywności Li + / Na +. W przeciwieństwie do człowieka. i kanały wykazywały tę samą wrażliwość na amiloryd (amiloryd Ki = 0,05. 0,02. M i.: amiloryd Ki = 0,08. 0,01. M) i selektywność (: ILi + / INa + = 1,6. 0,2, INa + / IK +> 50; i.: ILi + / INa + = 1,3. 0,1, INa + / IK +> 50) jako ludzkie kanały typu dzikiego, potwierdzając w ten sposób różnice gatunków w zależności od układów podjednostek. Podsumowując, chociaż pewne cechy różniły się od ludzkiego lub szczurzego kanału zmutowanego Na +, ważną i wspólną cechą dla obu gatunków jest to, że obserwowano zaskakująco duży, makroskopowy prąd wrażliwy na amiloryd, wykazujący tę samą opóźnioną kinetykę u obu gatunków. Kolejne badania przeprowadzono na kanale szczurów, dla którego dostępnych jest więcej informacji dotyczących ekspresji na powierzchni komórki (12). Zmniejszenie wyrażonej aktywności zmutowanego kanału jest spowodowane zmniejszoną liczbą kanałów na powierzchni komórki. Prąd Na + całej komórki można podsumować następującym równaniem: (Równanie 1) 1, gdzie gNa jest przewodnictwem jednokanałowym dla Na +, N jest całkowitą liczbą kanałów dla danej komórki, Po jest średnim prawdopodobieństwem otwarcia dla pojedynczej komórki kanał, E jest potencjałem błonowym, a ENa jest odwrotnym potencjałem dla Na + (16). Siłę napędową dla jonów Na + (Ea ENa) utrzymywano w przybliżeniu na stałym poziomie przez zaciśnięcie potencjału błonowego oocytów przy ~ 100 mV i nie można uwzględnić zaobserwowanego zmniejszenia zmutowanego prądu kanału. W celu określenia przewodności i Po zapisy jednokanałowe uzyskano 4 dni po wstrzyknięciu w konfiguracji z przyczepionymi komórkami z oocytów z wstrzykniętą A L535stop .. Przewodności jednokanałowe określone między. 150 i +10 mV wynosiły 4,03. 0,26 pS (n = 12) z Na + w pipecie i 5,08. 0,07 pS (n = 8) w obecności Li +. Oba były nieco niższe niż wartości podane dla ENaC typu dzikiego, ale ta różnica nie mogła wyjaśnić zmniejszenia prądu makroskopowego
[więcej w: tajemnice przyrody klasa 5 sprawdziany krajobrazy gór, krwawienie z przewodu pokarmowego icd 10, na wspólnej piosenka końcowa ]
[więcej w: tajemnice przyrody klasa 5 sprawdziany krajobrazy gór, pod zaborami sprawdzian, cda pod mocnym aniołem ]