Komórki T odpowiadające na GAD65 są aktywowane u pacjentów z cukrzycą autoimmunizacyjną typu 1a ad

Specyficznie, podawanie IgLA CTLA-4 lub mAb anty-B7-2 myszom NOD między 5 a 7 tygodniem życia zapobiega wystąpieniu cukrzycy, chociaż nie ma wpływu na rozwój lub ciężkość zapalenia trzustki (29). Podobnie, IgG CTLA-4 może zapobiegać doświadczalnemu autoimmunologicznemu zapaleniu mózgu zarówno podczas primingu antygenu, jak iw adopcyjnym modelu przenoszenia choroby poprzez hamowanie komórek Th1 (30, 31). Przeciwnie, leczenie anty-B7-1 lub kombinacją anty-B7-1 i mAb anty-B7-2 powoduje szybszy i cięższy początek cukrzycy u myszy i wywołuje chorobę u normalnie opornych samców myszy (29). . Podobnie, badania z użyciem transgenicznych myszy NOD wydzielających duże ilości krążącego CTLA-4 lub z uszkodzeniem genu CD28 (CD28 (3 / NOD) wykazały szybszy początek i wyższą ostrość cukrzycy w porównaniu z kontrolami z miotu (32). Tak więc szlak CD28 / B7 wydaje się być ważny w patogenezie autoimmunizacyjnej cukrzycy, a manipulacja tym szlakiem mogłaby dostarczyć cennego mechanizmu do zapobiegania aktywacji limfocytów T na obwodzie, co ma ważne implikacje w leczeniu chorób autoimmunologicznych. Ponieważ pacjenci z cukrzycą typu 1, jak również zdrowi pacjenci mają krążące komórki T reagujące na GAD65, badaliśmy, czy te autoreaktywne komórki T funkcjonowały jako wcześniej aktywowane komórki T pamięci i już nie wymagały drugiego sygnału kostymulującego do klonalnej ekspansji u pacjentów z cukrzycą w porównaniu z ze zdrowymi osobami kontrolnymi. Stwierdziliśmy, że u pacjentów z nowo rozpoznaną cukrzycą typu 1, komórki T reagujące na GAD65 są uderzająco mniej zależne od kostymulacji CD28 i B7-1, aby wejść w cykl komórkowy i proliferować w porównaniu z tymi u zdrowych osób z grupy kontrolnej. Dane te wskazują, że komórki T reagujące na GAD65 od pacjentów zostały uprzednio aktywowane in vivo i mają fenotyp funkcjonalnej pamięci. Ponadto zaobserwowaliśmy różne efekty z selektywną blokadą cząsteczek B7-1 lub B7-2; Wydawało się, że B7-1 dostarcza sygnał negatywny poprzez angażowanie CTLA-4, podczas gdy B7-2 prowadzi do zwiększenia proliferacji komórek T CD28 i sekrecji cytokin. Metody Pacjenci i kontrole. W badaniu wzięło udział 10 pacjentów z cukrzycą typu 1a o niedawnym początku (mniej niż 6 miesięcy od rozpoznania) (Tabela 1). Zakres wiekowy pacjentów wynosił 19. 35 lat, a średnia wieku wynosiła 28 lat. Ośmiu na dziesięciu pacjentów z cukrzycą miało typy HLA cukrzycy związane z DR3 lub DR4 lub oba. Badano również 9 osobników z grupy kontrolnej bez znaczącego wywiadu medycznego i przedział wiekowy 23. 36 (średnia wieku 31,5) (Tabela 2). Pięć normalnych kontroli miało typy HLA DR3 lub DR4 lub oba. Zbadano również pięciu dodatkowych pacjentów (trzy kobiety i dwóch mężczyzn w wieku 23. 34, średni wiek 27,6 lat), którzy chorowali na cukrzycę od ponad 5 lat. Próbki obwodowej krwi żylnej uzyskano po uzyskaniu świadomej zgody od pacjentów i kontroli i analizowano pod kątem reaktywności komórek T wobec GAD65. Wszystkie próbki krwi zostały natychmiast przetworzone i przeanalizowane. Tabela 1Autobusy i profil HLA chorych na cukrzycę typu 1. Tabela 2Autobusy przeciwciał i profil HLA prawidłowych kontroli Test proliferacji. PBMC oczyszczono za pomocą Ficoll-Paque (Amersham Pharmacia Biotech Europe GmbH, Uppsala, Szwecja) zgodnie z protokołem producenta. W ciągu 4 godzin od pobrania krwi PBMC (106 komórek / 100 | jl pożywki) wstępnie inkubowano z GAD65 (Diamyd Diagnostic AB, Sztokholm, Szwecja) lub toksoidem tężcowym (TT) (Massachusetts Department of Health, Boston, Massachusetts, USA) jako antygen kontrolny przez 2 godziny w obecności lub nieobecności blokujących Ab w polistyrenowych probówkach okrągłodennych (Becton Dickinson and Co., Franklin Lakes, New Jersey, USA). Po 2 godzinach inkubacji w 37 ° C, PBMC wysiano w ilości 1,5 x 105 komórek / studzienkę do 96-studzienkowych okrągłodennych płytek (Corning-CoStar Corp., Corning, Nowy Jork, USA) w pożywce RPMI-1640 uzupełnionej 2 mM L-glutamina, 5 mM HEPES i 100 U / (3 na mililitr penicyliny / streptomycyny (końcowa objętość 200 ul / studzienkę, wszystkie z BioWhittaker Inc., Walkersville, Maryland, USA), z 5% inaktywowanym termicznie ludzkim surowicy (Gemini Bio Products, Woodland, Kalifornia, USA). Stworzono dziesięć powtórzeń studzienek dla różnych stężeń antygenu (GAD65 zastosowany przy 0,1, 1, 5, 10, 20 | ig / ml i TT zastosowany przy 0,01, 0,1, jednostkach flokulacji / ml [Lf / ml]) w obecności jeden z poniższych blokujących Ab: przeciw-CD28 (klon 3D10), anty-CTLA-4 (IgG1, klon 26B), anty-B7-1 (IgG2b, klon H1F1), anty-B7-2 (IgG2b, klon H3D1), wszystkie dostarczone przez Genetic Institute (Cambridge, Massachusetts, USA) i oczyszczone mysie IgG F (ab.) Jako kontrolne Ab (ICN Biomedicals, Aurora, Ohio, USA)
[więcej w: kuchnia wegetariańska przepisy, produkty bogate w węglowodany, jadłospis 8 miesięcznego niemowlaka ]
[więcej w: jak sprawdzić jaką mam kartę graficzną, materiały i tworzywa pochodzenia naturalnego sprawdzian, kompass 3 sprawdziany ]