Niedobór CD36 zaburza wydzielanie lipidów jelitowych i usuwanie chylomikronów z krwi czesc 4

Osocze zebrano 3 godziny po wstrzyknięciu i zmierzono poziomy TAG. P <0,0001. (C) Wpływ trytonu na TAG plazmy na czczo. WT (wypełnione kwadraty) i myszy pozbawione CD36 (puste kwadraty) (n = 4) otrzymały iniekcje trytonu dootrzewnowo. Osocze zebrano we wskazanych punktach czasowych i zmierzono poziomy TAG. (D) Wielkość Chylomicron po doustnym obciążeniu tłuszczem. Chylomikrony wyizolowano z osocza WT (czarne słupki) i myszy pozbawionych CD36 (białe słupki) 3 godziny po dożołądkowym zgłębniku oliwy z oliwek (16,5 .l / g). Wielkość cząstek określono metodą mikroskopii elektronowej z ujemnym barwieniem. Chylomikrony są wydzielane z jelita w postaci dużych cząstek, które zmniejszają się dzięki lipolitycznym działaniom lipazy lipoproteinowej (LPL); w związku z tym rozmiar chylomikronu może zapewnić pomiar aktywności lipazy in vivo. Chylomikrony wyizolowano z osocza myszy 3 godziny po sondowaniu oliwą z oliwek, a ich wielkość zmierzono metodą mikroskopii elektronowej z ujemnym barwieniem. Chylomikrony z myszy WT miały głównie (97%) mniej niż 101 nm średnicy (Figura 4D), podczas gdy większość chylomikronów z myszy pozbawionych CD36 (78%) miała średnicę 201. 700 nm, co dodatkowo wskazywało na defekt lipazy. Zbadaliśmy także poziomy plazmy głównych apolipoprotein uczestniczących w tworzeniu i usuwaniu chylomikronów. ApoB jest głównym białkowym komponentem chylomikronów, a podwyższone poziomy TAG w osoczu są zazwyczaj związane ze zwiększonymi poziomami apoB w osoczu. Zgodnie z oczekiwaniami, stężenia apoB zwykle były wyższe w osoczu myszy karmionych CD36-null w porównaniu z myszami WT (118,2. 34,8 w porównaniu z 68,0. 5,7 mg / l; n = 5; P = 0,09), nawet jeśli poszczenie poziomy apoB nie wzrosły u myszy pozbawionych CD36 (dane nie pokazane). ApoE wiąże lipoproteiny bogate w TAG i jest niezbędny do usuwania resztek chylomikronu z wątroby. W celu zmierzenia zarówno poziomu apoE, jak i jego związku z poposiłkowymi lipidami, wyizolowaliśmy frakcje VLDL / chylomikron z osocza metodą chromatografii wykluczania. Jak pokazano na Fig. 5, względne poziomy apoE w tych frakcjach były wyższe u myszy pozbawionych CD36 niezależnych od statusu żywieniowego i najwyższych poziomów apoE, kumulowanych z poziomami TAG w osoczu. Podanie tłuszczu doustnego podniosło poziom apoE w tych frakcjach u myszy WT i myszy pozbawionych CD36. Figura 5 ApoE związane z TAG z osocza. WT (wypełnione kwadraty) i myszy pozbawione CD36 (puste kółka) (n = 3) otrzymały dożołądkowy zgłębnik soli fizjologicznej lub oliwy z oliwek (16,5. L / g). Po 2 godzinach zebrano osocze i połączono, a frakcję VLDL / chylomikron wyizolowano metodą chromatografii wykluczania. Poziomy TAG i ApoE w osoczu mierzono w każdej frakcji. Myszy z niedoborem CD36 mają normalną aktywność lipazy postheparinowej. Postheparyna LPL i aktywność lipazy wątrobowej (HL) w osoczu nie różniły się pomiędzy myszami pozbawionymi CD36 a WT (Figura 6A). Aktywność lipazy związanej z komórkami mierzono również w tkance sercowej pobranej w nieobecności heparyny i nie obserwowano żadnego zmniejszenia aktywności LPL (danych nie przedstawiono). Aktywność LPL może być hamowana przez plazmowe FA (24). Myszy CD36-null mają podwyższony poziom FA w osoczu na czczo (6, 25), ale nie wiadomo, czy poziomy FA wzrastają również po posiłku i wpływają na aktywność LPL i klirens lipoprotein. Jak pokazano na Fig. 6B, poziomy FA w osoczu mierzone po soku z oliwy z oliwek były istotnie wyższe u myszy pozbawionych CD36 i były ściśle skorelowane z poziomami TAG w osoczu (Figura 6C) (r = 0,7452, P = 0,0001; n = 19). Figura 6 Aktywność lipazy w osoczu i poziomy w osoczu krwi w osoczu. (A) Aktywność LPL i HL. WT (czarne słupki) i myszy pozbawione CD36 (białe słupki) (n = 5) otrzymały iniekcje ip heparyny. Po 30 minutach zebrano osocze i zmierzono aktywność lipazy. (B i C) Poziomy osoczowe FA korelują z poziomami TAG w osoczu. Na czczo WT (czarne słupki) i myszy pozbawione CD36 (białe słupki) (n = 4. 6) podano oliwę z oliwek (3,5. L / g) przez zgłębnik. Osocze zebrano 2. 3 godziny po sondowaniu. Poziomy osocza FA mierzono (B) i korelowano z poziomami TAG w osoczu (C). * P <0,001; ** P <0,02. Obfitość mRNA Apoc3 jest zmieniona u myszy pozbawionych CD36. Aktywność LPL może być modulowana przez apolipoproteiny, w szczególności apoC-I, apoC-II i apoC-III. Obfitość mRNA. Apoc1, Apoc2 i Apoc3, odpowiednio. kodowanie tych białek mierzono w bliższym jelicie (Apoc2 / Apoc3) i wątrobie (Apoc1 / Apoc2 / Apoc3). Nie wykryto znaczących różnic w liczebności mRNA Apoc1 lub Apoc2 między WT i myszami pozbawionymi CD36 po sondowaniu oliwą z oliwek (Figura 7). Z drugiej strony, mRNA kodujący apoC-III, silny inhibitor LPL, był znacząco zwiększony u myszy bez CD36 zarówno w jelicie, jak i w wątrobie. [hasła pokrewne: stomatologia dziecięca łódź, sprawdzian z fizyki 1 gimnazjum, witamina c lewoskrętna w proszku ] [hasła pokrewne: sprawdzian z fizyki 1 gimnazjum, regulacja nerwowo hormonalna sprawdzian, środki czystości i kosmetyki sprawdzian ]