Komórki T odpowiadające na GAD65 są aktywowane u pacjentów z cukrzycą autoimmunizacyjną typu 1a ad 6

Tę samą tendencję zaobserwowano, gdy komórki T były stymulowane antygenem przypominającym TT w dwóch badanych grupach. Wyniki te potwierdziły wcześniejsze badania wskazujące, że ekspresja CTLA-4 po aktywacji komórek T jest odpowiedzialna za dostarczenie sygnału ujemnego, a jego interakcja z ligandami z rodziny B7 powoduje obniżenie odpowiedzi limfocytów T. Proliferacja komórek T jest regulowana przez różne oddziaływania CD28 / CTLA-4 i B7-1 / B7-2. Rola wiązania B7-1 i B7-2 CD28 i CTLA-4 w regulacji odpowiedzi immunologicznej nie jest dobrze zdefiniowana. Ponieważ blokada B7-2 hamowała odpowiedzi zarówno u pacjentów z cukrzycą, jak i u zdrowych osób w każdym stężeniu antygenu, zbadaliśmy wpływ blokowania receptorów CD28 lub CTLA-4 w kombinacji z B7-1 lub B7-2 u pięciu pacjentów z cukrzyca typu i pięć normalnych osób z grupy kontrolnej. Read more „Komórki T odpowiadające na GAD65 są aktywowane u pacjentów z cukrzycą autoimmunizacyjną typu 1a ad 6”

Komórki T odpowiadające na GAD65 są aktywowane u pacjentów z cukrzycą autoimmunizacyjną typu 1a ad 5

Dane te potwierdzają naszą poprzednią pracę, że szlak CD28 / B7 nie jest wymagany do proliferacji limfocytów T w celu przywoływania antygenów u ludzi (15). Blokada B7-1 i B7-2 hamuje proliferację podobnie do anty-CD28. Zarówno B7-1, jak i B7-2 są wyrażane na APC i dostarczają sygnał stymulujący do komórek T poprzez przeciwreceptor CD28. Jak zaobserwowano przy blokowaniu anty-CD28, fragmenty anty-B7-1 F (ab.) Hamowały proliferację i wydzielanie cytokin do GAD65 u zdrowych osobników (Figura 3). Blokada B7-1 również hamowała odpowiedź proliferacyjną GAD65 i wydzielanie cytokin u pacjentów z cukrzycą, ale tylko przy niskich stężeniach antygenu. Read more „Komórki T odpowiadające na GAD65 są aktywowane u pacjentów z cukrzycą autoimmunizacyjną typu 1a ad 5”

Komórki T odpowiadające na GAD65 są aktywowane u pacjentów z cukrzycą autoimmunizacyjną typu 1a czesc 4

W istocie, różnie aktywowaliśmy niemanipulowane PBMC ex vivo, aby zbadać ich stan funkcjonalny. Przeprowadzono dwadzieścia cztery oddzielne eksperymenty z użyciem krwi od zdrowych ochotników, pacjentów z nowo rozpoznaną cukrzycą typu lub od pacjentów, którzy chorują na cukrzycę od ponad 5 lat. PBMC stymulowano rekombinowanym ludzkim GAD65 w obecności lub nieobecności przeciwciał monoklonalnych anty-CD28F (ab .). Po 5 dniach hodowli dodano rIL-2 w celu napędzania klonalnej ekspansji komórek T reagujących na antygen, aby lepiej wykrywać odpowiedzi antygenowe. Zarówno pacjenci, jak i zdrowi osobnicy uzyskali silną odpowiedź komórek T na sam antygen GAD65, jak pokazano w 19 eksperymentach opisanych na Figurze 1a. Read more „Komórki T odpowiadające na GAD65 są aktywowane u pacjentów z cukrzycą autoimmunizacyjną typu 1a czesc 4”

Komórki T odpowiadające na GAD65 są aktywowane u pacjentów z cukrzycą autoimmunizacyjną typu 1a cd

Wszystkie blokujące Ab były przetwarzane na fragmenty F (ab) zgodnie z instrukcjami producenta (Pierce Chemical Co., Rockford, Illinois, USA), miareczkowano i stosowano w stężeniu 5 .g / ml. Kontrolne studzienki także ustalono bez antygenu w obecności lub nieobecności każdego z blokujących Ab. W piątym dniu hodowli do studzienek dodano 20 U / ml rekombinowanej ludzkiej IL-2 (rh IL-2) (Teceleukin, National Cancer Institute, Frederick, Maryland, USA), a w dniu 10-12, supernatanty. zostały usunięte w celu wykrycia cytokin, a 1. Ci [3H] tymidyny (NEN Life Science Products, Boston, Massachusetts, USA) dodano do każdej studzienki. Read more „Komórki T odpowiadające na GAD65 są aktywowane u pacjentów z cukrzycą autoimmunizacyjną typu 1a cd”

Poczynając od matki i matki przekazywać stymulujące białko G podjednostka nokautów wywołuje przeciwny wpływ na metabolizm energetyczny ad 6

Stężenie glicerolu i FFA było podobne u myszy m / / + i ich myszy z miotu typu dzikiego w punkcie wyjściowym oraz po 15 minutach i 2 godzinach po podaniu CL316243 (Figura 4f i dane nie pokazane), zgodne z normalną odpowiedzią lipolityczną na maksymalne a 3- stymulacja adrenergiczna. Odpowiedź poziomów insuliny i glukozy w surowicy na CL316243 była również normalna u myszy m / / +, przy czym poziomy insuliny w surowicy wzrastały znacząco, a poziom glukozy w surowicy zmniejszał się (dane nie pokazane). Podobne wyniki dla glicerolu w surowicy, FFA, insuliny i glukozy uzyskano w stanie po posiłku (dane nie pokazane). Katecholaminy moczowe i ich metabolity. Ponieważ Gs. Read more „Poczynając od matki i matki przekazywać stymulujące białko G podjednostka nokautów wywołuje przeciwny wpływ na metabolizm energetyczny ad 6”

Poczynając od matki i matki przekazywać stymulujące białko G podjednostka nokautów wywołuje przeciwny wpływ na metabolizm energetyczny ad 5

Te przeciwne zmiany w działaniu powinny prowadzić do jeszcze większych zmian w całkowitym wydatku energetycznym w + / p. i myszy m / / +. Ryc. 4 Przyjmowanie pokarmu i badania metabolizmu u m. / + I + / p. Read more „Poczynając od matki i matki przekazywać stymulujące białko G podjednostka nokautów wywołuje przeciwny wpływ na metabolizm energetyczny ad 5”

Poczynając od matki i matki przekazywać stymulujące białko G podjednostka nokautów wywołuje przeciwny wpływ na metabolizm energetyczny cd

W celu normalizacji dla obciążenia różnicami, rybosomalne RNA 28S barwiono bromkiem etydyny i oznaczano ilościowo przy użyciu oprogramowania Gel Expert (NucleoTech Corp., San Mateo, California, USA). Przygotowanie błony i analiza immunoblot. W celu wytworzenia całych błon z brązowej tkanki tłuszczowej (BAT), tkankę homogenizowano w lodowatym buforze lodowym (0,25 M sacharoza, 10 mM Tris, mM EDTA, mM MgCl2 [pH 7,4], zawierającym inhibitor proteazy [Complete capsules; Boehringer Mannheim]) z tłuczkiem teflonowym i odwirowywano przy 250 g przez 10 minut w 20 ° C. Supernatant ponownie wirowano przy 436 000 g w rotorze TLA100.3 (Beckman Instruments Inc., Fullerton, Kalifornia, USA) przez 30 minut w 4 ° C, a osad membranowy ponownie zawieszono w buforze membranowym i przechowywano w temperaturze <70 ° C. Stężenie białka oznaczano przy użyciu zestawu BCA (Pierce Chemical Co., Rockford, Illinois, USA). Read more „Poczynając od matki i matki przekazywać stymulujące białko G podjednostka nokautów wywołuje przeciwny wpływ na metabolizm energetyczny cd”

Poczynając od matki i matki przekazywać stymulujące białko G podjednostka nokautów wywołuje przeciwny wpływ na metabolizm energetyczny ad

W niniejszym raporcie szczegółowo scharakteryzujemy te fenotypy i wykazujemy, że zmiany te są związane ze zmniejszeniem i zwiększeniem metabolizmu energetycznego w m. / + I + / p. myszy, odpowiednio. Metody Myszy. Myszy z wstawieniem kasety oporności na neomycynę do egzonu 2 z Gnas zostały wcześniej utworzone przez ukierunkowaną mutagenezę (8). Read more „Poczynając od matki i matki przekazywać stymulujące białko G podjednostka nokautów wywołuje przeciwny wpływ na metabolizm energetyczny ad”

Komórki T odpowiadające na GAD65 są aktywowane u pacjentów z cukrzycą autoimmunizacyjną typu 1a ad 8

Dane te doprowadziły nas do postawienia hipotezy, że istnieje preferencyjne zaangażowanie CTLA-4 w B7-1, a ich interakcja może działać w celu obniżenia odpowiedzi immunologicznej, podczas gdy proliferacja komórek T i wytwarzanie cytokin jest regulowana w górę przez zaangażowanie CD28-B7-2. Dane te potwierdzają ostatnie badania przeprowadzone na zwierzęcym modelu przeszczepu, wykazujące, że blokada CTLA-4 lub B7-1 znacznie przyspieszyła odrzucenie alloprzeszczepu serca u przeszczepionych myszy z niedoborem CD28, podczas gdy blokada B7-2 przedłużała przeżycie przeszczepu, sugerując, że B7-1. jest dominującym ligandem dla mediowanej przez CTLA-4. regulacji w dół odpowiedzi alloimmunologicznej in vivo. W przeciwieństwie do B7-2 zapewnia pozytywny sygnał kostymulujący dla komórek T (49). Read more „Komórki T odpowiadające na GAD65 są aktywowane u pacjentów z cukrzycą autoimmunizacyjną typu 1a ad 8”

Nowa rola inhibitora kinazy zależnej od cykliny p27Kip1 w stymulowanym przez angiotensynę IIp rozkurczu komórek mięśni gładkich naczyń cd

Po 2 przemyciach PI-PBS zastosowano drugorzędowe przeciwciało skierowane przeciw FITC przeciw koziemu w PI-PBS (1: 1000, Caltag Laboratories Inc., Burlingame, California, USA) przez godzinę w 37 ° C. Po kolejnych dwóch przemyciach komórki zawieszono ponownie w 500 ul PI-PBS i analizowano pod kątem zawartości DNA (PI) i FALS komórek FITC (p27Kip1). Komórki wyrażające zielone białko fluorescencyjne (GFP) przetwarzano jak opisano powyżej i bezpośrednio analizowano pod względem zawartości DNA i FALS. Przygotowanie lizatów komórkowych i analiza Western immunoblot. Komórki przepłukano PBS i poddano lizie w lodowatym buforze RIPA (1 x PBS, 1% NP-40, 0,5% dezoksycholanie sodu, 0,1% SDS, 10 .g / ml PMSF, 30 .g / ml aprotyniny, mol / L ortowanadan sodu). Read more „Nowa rola inhibitora kinazy zależnej od cykliny p27Kip1 w stymulowanym przez angiotensynę IIp rozkurczu komórek mięśni gładkich naczyń cd”